Pembuatan Larutan Bufer

Larutan bufer berfungsi untuk mempertahankan pH larutan ketika ada penambahan asam, basa, maupun pengenceran. Larutan bufer sangat diperlukan dalam melakukan penelitian pada bidang biokimia karena sebagian besar molekul biokimia merupakan elektrolit lemah. Sifat ionik dari elektrolit lemah bergantung pada pH. Bufer diperlukan untuk menstabilkan sifat ionik tersebut selama penelitian berlangsung.

Larutan bufer mengandung campuran asam lemah dan basa konjugasinya. Basa konjugasi akan menetralkan penambahan ion hidrogen (senyawa asam) sedangkan asam lemah akan menetralkan penambahan ion hidroksida (senyawa basa) (Wilson dan Walker, 2010). Penyiapan larutan bufer dapat dilakukan dengan menggunakan persamaan Henderson Hesselbalch berikut:

Contoh: 

Bagaimana cara membuat 1 L bufer fosfat 0,1 M pH 7,1 jika diketahui pKa₂ dari asam fosfat adalah 6,8 dan massa atom untuk Na, P dan O dalah 23, 31, dan 16?

Jawab:

Bufer fosfat akan memiliki kesetimbangan ionisasi sebagai berikut:

H₂PO₄^- ↔ HPO₄^2- + H⁺    pKa₂ = 6,8

Kesetimbangan ionisasi tersebut dapat dibuat dengan mencampurkan senyawa natrium dihidrogen fosfat (NaH₂PO₄) dan dinatrium hidrogen fosfat (Na₂HPO₄). Dengan menggunakan persamaan Henderson-Hasselbalch maka diperoleh:

Karena total konsentrasi bufer yang diperlukan adalah 0,1M maka [HPO₄^2-] yang diperlukan adalah 0,067 M dan [H₂PO₄^-] yang diperlukan adalah 0,0333 M. Massa molekul Na₂HPO₄ dan NaH₂PO₄ adalah 142 dan 120, maka massa Na₂HPO₄ dan NaH₂PO₄ yang diperlukan adalah 9,46 g dan 4,00 g. Kedua senyawa dilarutkan terlebih dahulu dengan 800 mL akuades, kemudian ukur pH hingga 7,1 (Tepatkan pH dengan menggunakan HCl dan/atau NaOH). Setelah pH tepat 7,1; tambahkan akuades hingga volumenya 1 L.

Pustaka

Wilson K., & Walker, J. (2010). Principles and Techniques of Biochemistry and Molecular Biology (7^th ed.). Cambridge University Press